Skip to content

dermatolog w ramach nfz warszawa

3 miesiące ago

573 words

Przeprowadzono trzy niezależne doświadczenia, a średnie wartości z SE przedstawiono graficznie, z wartościami P oznaczonymi w dniach 10-15 w teście ucznia (przedział ufności, 95%). W celu wykonania badania morfologicznego, preparaty komórek osocza cytospinowego wybarwiono barwnikiem Wrighta-Giemsy i zbadano pod mikroskopem świetlnym. Apoptozę mierzono za pomocą cytometrii przepływowej po reakcjach z aneksyną V skoniugowaną z fikoerytryną (PharMingen, San Diego, Kalifornia, USA) i 7-amino-aktynomycyną (7-AAD) zgodnie z protokołem producenta w dniach 0, 1, 4 kultury, i 10 z lub bez ZnSO4 w potrójnych doświadczeniach. Komórki zawierające aneksynę V. Dodatnią i istotną barwnik. Ujemną zliczano jako komórki apoptotyczne. RT-PCR. RT-PCR dla drugorzędowych białek granulocytów obojętnochłonnych, ludzkiej laktoferyny neutrofili i kolagenazy neutrofilowej, przeprowadzono standardowymi metodami, jak opisano poprzednio (24). Wszystkie produkty PCR poddano elektroforezie w 1,5% żelu agarozowym i przeniesiono na membranę nylonową przez przeniesienie zasadowe. Hybrydyzację błon przeprowadzono z użyciem znakowanych na końcu końcowym sond oligonukleotydów wewnętrznych (a-32P) ATP w celu potwierdzenia swoistości produktu PCR. Starter PCR i sekwencje wewnętrznej sondy oligonukleotydowej oraz warunki PCR będą dostarczone na żądanie. Każde doświadczenie obejmowało normalny ludzki cDNA neutrofili jako kontrolę pozytywną, a całe doświadczenie powtarzano co najmniej 3 razy przy użyciu próbek RNA wytworzonych niezależnie z oddzielnych hodowli. Wyniki Wywołane retinoidami ekspresja C / EBP. w komórkach szpikowych pośredniczy RAR .. RAR, zwłaszcza RARa, ulegają ekspresji w większości linii komórek krwiotwórczych i ich odpowiednich linii komórkowych (39). Poziomy RAR. ekspresja w linii komórkowej APL znanej jako NB4 nie była znacząco regulowana przez ekspozycję na retinoidy (31). Komórki NB4 inkubowano z różnymi analogami RARp, RARa, RARa i RXR (5 x 10 ~ 7 M przez 3 dni), w tym z panagonistami, takimi jak 9-cis RA i SR11256, jak również analogami. selektywny dla RAR. (AM580), RAR. (SR11346, SR11262), RAR. (SR11254, SR11248), RAR (ATRA) i RXR (SR11246) i jeden z aktywnością antyA AP-1 (SR11283). Wyrażenie C / EBP. białko było najsilniej regulowane w górę przez ATRA i 9-cis RA (Figura 1a). Ligandy dla RAR. miał największy wpływ na C / EBP. indukcja (rysunek 1, aib). Nieznaczne wzrosty C / EBP. Ekspresję mRNA obserwowano, gdy komórki NB4 hodowano z selektywnym ligandem RARy (Figura 1b). Selektywne ligandy RARy, selektywny ligand RXR i ligand anty-AP-1 nie miały wpływu na indukcję C / EBP. wyrażenie (rysunek 1, aib). Rycina Synteza C / EBP. ekspresja przez selektywne ligandy receptora retinoidowego w komórkach NB4. Komórki NB4 inkubowano z selektywnymi ligandami receptora retinoidowego (5 x 10 ~ 7 M) i zbierano do całkowitego RNA lub całkowitych lizatów komórkowych. (a) Analiza Western blot C / EBP .. Komórki NB4 zbierano po 2 i 4 dniach indukcji różnicowania. Komórki COS-1 transfekowane C / EBP. wektor ekspresyjny lub pusty wektor zastosowano jako kontrole pozytywne (+) i negatywne (.). Strzałki oznaczają C / EBP .. (b) Analiza Northern blot dla C / EBP. mRNA przez hybrydyzację z pełnej długości C / EBP. sonda cDNA. Górny panel pokazuje C / EBP. mRNA 1,2 kb, a dolny panel pokazuje barwy 28S i 18S wybarwione bromkiem etydyny, aby potwierdzić równoważny ładunek RNA. Retinoidalna regulacja poziomu C / EBP. aktywność promotora / wzmacniacza poprzez domniemaną RZADKĘ. Aby zbadać dalej zależną od retinoidów aktywację transkrypcyjną C / EBP. przez RAR ., 0,5 kb C / EBP. region promotorowy / wzmacniający został wklonowany w konstrukt reportera CAT albo z minimalnym promotorem tk (p0.5-tk-CAT, p0.5-CAT), albo bez niego (Figura 2a). PRE, pusty plazmid reporterowy CAT z minimalnym promotorem tk, zastosowano jako kontrolę
[hasła pokrewne: złoto koloidalne, allmedica nowy sącz, leobert allegro ]

0 thoughts on “dermatolog w ramach nfz warszawa”