Skip to content

detox szczecin zdroje

3 miesiące ago

572 words

Aby zbadać działanie RAS działających poprzez receptory AT1 w celu regulacji odpowiedzi immunologicznych, wykorzystano myszy, w których gen kodujący receptor AT1A (Agtr1a) został rozbity przez celowanie genowe (29). Nasze badania sugerują, że angiotensyna II działa jako czynnik autokrynny w odpowiedziach alloimmunologicznych, promując proliferację komórek T. Metody Zwierzęta. Myszy pozbawione receptorów AT1A dla angiotensyny II wytworzono przez rekombinację homologiczną w embrionalnych komórkach macierzystych, jak opisano poprzednio (29). Aby uniknąć potencjalnego zakłócającego wpływu heterogenicznego tła genetycznego na interpretację naszych doświadczeń, mutację Agtr1a krzyżowano wstecznie na więcej niż 10 pokoleń na tle C57BL / 6. Genotypy Agtr1a, oznaczone (+) dla allelu typu dzikiego i ((3) dla docelowego allelu, określono przez analizę Southern błot DNA wyizolowanego z biopsji ogona, jak opisano w innym miejscu (29). Inbred C57BL / 6 Agtr1a + / + lub Agtr1a. /. Myszy użyto we wszystkich doświadczeniach. Zwierzęta hodowano i utrzymywano w ośrodku dla zwierząt w Durham VA Medical Center zgodnie z wytycznymi Narodowego Instytutu Zdrowia. [125I] Autoradiografia receptora angiotensyny II. Wiązanie angiotensyny II w całej śledzionie zostało określone przez autoradiografię receptora, jak opisaliśmy wcześniej (29). Śledziony usunięto z Agtr1a + / + i Agtr1a. /. myszy, a tkanki zostały osadzone w związku OTC (Miles Inc., Elkhart, Indiana, USA) i zamrożone w izopentanie chłodzonym ciekłym azotem. Bloki tkankowe dzielono seryjnie (15 .m) na kriostacie i odwilżano na szklanych szkiełkach mikroskopowych (FisherPlus, Fisher Scientific, Pittsburgh, Pennsylvania, USA). Skrawki inkubowano z buforem zawierającym 200 pM [125I] angiotensyny II. Nadmiar stężenia (10 .M) nieznakowanej angiotensyny II, losartanu (antagonisty receptora AT1) lub PD123319 (antagonisty receptora AT2) dodano do niektórych sekcji w celu określenia specyficzności wiązania. Po inkubacji przez godzinę szkiełka płukano, suszono przez noc, a następnie eksponowano na błonę rentgenowską o wysokiej rozdzielczości (Hyperfilm-betamax; Amersham International, Little Chalfont, Buckinghamshire, Wielka Brytania). Badania wiązania radioliganda z użyciem [125I] angiotensyny II. Wiązanie angiotensyny II w splenocytach oceniano przez wiązanie radioliganda, jak opisano poprzednio (30), przy użyciu [125I] angiotensyny II. Zawiesiny splenocytów przygotowano z Agtr1a + / + i Agtr1a2 /. myszy delikatnie mieląc śledzionę między szklanymi preparatami. Komórki przemyto jeden raz w PBS, a następnie ponownie zawieszono w lodowatym PBS zawierającym 10 mM Tris HC1 (pH 7,4), 1% BSA. Podwielokrotności splenocytów 5 × 105 inkubowano w trzech powtórzeniach z 20 pM [125I] angiotensyny II przez 30 minut w 37 ° C z lub bez nadmiernych stężeń niewyznakowanej angiotensyny II, losartanu lub PD123319. Mieszaniny inkubacyjne filtrowano przez filtry z włókna szklanego Whatman GF / C (VWR Scientific, Westchester, Pennsylvania, USA). Po przemyciu oznaczono liczbę znakowanych limfocytów za pomocą licznika gamma, a specyficzne wiązanie obliczono stosując wzorce standardowe (30). Identyfikacja mRNA receptora AT1A za pomocą RT-PCR. Ekspresję mRNA receptora AT1A oceniano za pomocą RT-PCR, jak opisano wcześniej (7). Splenocyty wytworzono z Agtr1a + / + i Agtrlla. / l. myszy, jak już opisano tutaj. Komórki T śledziony izolowano przy użyciu dostępnej w handlu kolumny rozdzielającej (R & D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA), komórki śledziony B izolowano przez płukanie stosując wielowartościowe przeciwciało przeciw mysiej IgG i śledzionowe makrofagi izolowano przez przyleganie plastyczne. Całkowite RNA wyizolowano z tych preparatów komórkowych, stosując Tri-reagent (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA), a 0,5 .g poddano odwrotnej transkrypcji stosując startery oligo-dT.
[patrz też: opadnięta powieka, żółty stolec, acetylowany adypinian diskrobiowy ]

0 thoughts on “detox szczecin zdroje”

  1. [..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: stomatolog bielany warszawa[…]