Skip to content

dr pustułka legnica

4 miesiące ago

582 words

Gdy transkrypty PTH, które wykluczyły 3a -UTR lub koniec 60 nt zostały dodane do spolimeryzowanych mikrotubul w takim samym stosunku jak kontrole, transkrypty były obecne w supernatancie, a nie w peletce mikrotubuli (nie pokazano). Użyto innego transkryptu, RNA CaSR, ponieważ jest on również wysoce eksprymowany w przytarczyce (2). Ten transkrypt ma długość 5000 nt; w związku z tym transkrybowaliśmy osobno transkrypty dla pierwszych około 3000 nt, które obejmują większość regionu kodującego i transkrypty dla terminala około 1500 nt, co obejmuje nienaruszone 3a -UTR. Transkrypty dla regionu kodującego CaSR (nie pokazanego) i 3 -UTR, które nie wiązały LC8 (Figura 2b) były obecne w supernatancie, a nie w peletce (Figura 3b). Wiązanie się spolimeryzowanych mikrotubul pełnych długości mRNA PTH, a nie mRNA Ca-3 CaSR, sugeruje, że zdolność do wiązania LC8 jest ważna dla tej interakcji. Aby wykazać in vivo, że mRNA PTH zlokalizowany jest z frakcją mikrotubuli w tkance tarczycy, stabilizowane paklitakselem cytosolowe ekstrakty z tkanki tarczycy poddano sedymentacji, aby oddzielić pelet od supernatantu, jak poprzednio. RNA wyekstrahowano z obu frakcji i analizowano na mRNA PTH, stosując analizę Northern blot. Gdy nie było polimeryzacji frakcji mikrotubuli (brak paklitakselu i GTP dodanych do wyciągu cytosolowego), cały mRNA PTH był obecny w supernatancie (Figura 3c). Po polimeryzacji z paklitakselem i GTP mRNA PTH znaleziono głównie w osadzie mikrotubuli przytarczycy (Figura 3c). Aby pokazać, że kolokalizacja RNA PTH ze spolimeryzowanym granulatem mikrotubuli była zależna od kompleksu dyneiny, dodaliśmy ATP (5 mM) i NaCl (1 M) do preparatu mikrotubul parathormów, o którym wiadomo, że prowadzi do dysocjacji dyneiny z mikrotubule (18, 22). Dodanie ATP i NaCl spowodowało przesunięcie mRNA PTH i kompleksu dyneiny z peletki do supernatantu (Figura 3c). Analiza metodą Western blot próbek peletek i supernatantów z przeciwciałami IC wykazała, że kompleks dyneiny kolokalizował się z mRNA PTH i był eluowany przez ATP i NaCl (Figura 3c). Samo wysokie stężenie NaCl może zaburzać wiązanie z innymi składnikami ekstraktu. Dlatego dodaliśmy oddzielnie ATP i NaCl. Sam ATP doprowadził do przesunięcia mRNA PTH z peletki do supernatantu (Figura 3c). Dodatek samego NaCl nie miał wpływu na połączenie mRNA PTH z preparatem mikrotubuli. Cały mRNA PTH pozostał w peletce (Figura 3c). Dlatego dysocjacja mRNA PTH ze spolimeryzowanych mikrotubul była zależna od ATP, a nie zależna od NaCl. Sugeruje to, że efekt nie zależy od wiązania z aktyną, pośrednimi włóknami, membranami lub niespecyficznymi agregatami. Błony poddano rehybrydyzacji do rybosomalnego RNA jako kontroli. Z i bez polimeryzacji mikrotubul, ATP i NaCl, RNA rybosomalne występowało głównie w supernatancie preparatu cytosolowego (Figura 3c), co wskazuje, że kolokalizacja mRNA PTH z peletką mikrotubuli była specyficzna. Wyniki z Figury 3, ay, wskazują, że mRNA PTH jest związany z mikrotubulami zarówno in vivo, jak i in vitro i sugeruje, że LC8 może pośredniczyć w tym połączeniu. Aby wykazać, że mRNA PTH jest związany z dyneiną in vivo w przytarczycach, immunoprecypitowaliśmy kompleks dyneinowy przeciwciałem przeciwko IC (74-1 mAb) i zbadaliśmy obecność mRNA PTH w immunoprecypitacie. Białko LC8 jest pochowane głównie w dużych kompleksach makromolekularnych, z którymi się wiąże, a zatem przeciwciała przeciwko LC8 nie mogą uzyskać do niego dostępu. Z tego powodu immunoprecypitowaliśmy z ekstraktu cytoplazmatyczną dyneinę za pomocą przeciwciała IC
[przypisy: grzybek tybetański allegro, opadnięta powieka, mielopatia szyjna objawy ]

0 thoughts on “dr pustułka legnica”

  1. [..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: rehabilitacja opole[…]