Skip to content

gaca wczasy odchudzające

4 miesiące ago

591 words

Oczyszczone preparaty mikrotubul mózgowych łydek, które zawierały MAP, zostały złożone w obecności paklitakselu i GTP i inkubowane z całkowitym RNA z tkanki tarczycy tarczycy. Polimeryzowane mikrotubule osadzono w osadzie, a RNA, który ekstrahowano zarówno z supernatantów (S) i peletek (P), badano na mRNA PTH metodą analizy Northern. MRNA PTH był obecny w spolimeryzowanym granulacie mikrotubuli, a nie w supernatancie. Gdy zwiększając stężenia LC8 dodano do preparatu RNA-mikrotubula, nastąpiło przesunięcie mRNA PTH z peletki do supernatantu, co wskazuje, że LC8 pośredniczy w połączeniu mRNA PTH z mikrotubulami. (b) RNA transkrybowane in vitro dla PTH lub CaSR3 -UTR inkubowano bez (.) lub z (+) spolimeryzowanymi preparatami mikrotubuli mózgu łydek, które zawierały MAP, a próbki odwirowano w celu oddzielenia peletki mikrotubuli (P) z supernatantu (S). RNA z obu frakcji analizowano za pomocą analizy Northern blot (górne 2 panele). Gdy nie dodano mikrotubuli, mRNA PTH znajdował się w supernatancie. W spolimeryzowanych mikrotubulach w peletce mikrotubuli znajdował się mRNA PTH, a w supernatancie obecny był RNA 3 -UTR CaSR3. Analizę Western blot próbek każdej frakcji z przeciwciałem 74-1 do dyneiny IC 74 pokazano na dolnym panelu. IC było obecne w peletce mikrotubuli. (c) Wyciągi białka cytosolowego pochodzące z tkanki tarczycy tarczycy były inkubowane bez lub z paklitakselem i GTP w celu polimeryzacji endogennych mikrotubul, z lub bez ATP (5 mM) i NaCl (1 M), i próbki były odwirowywane w celu oddzielenia peletki mikrotubuli ( P) z supernatantu (S). Próbki badano następnie pod kątem PTH i rybosomalnego RNA przy użyciu analizy Northern blot. W nieobecności paklitakselu i GTP zarówno PTH jak i rybosomalny RNA (28S i 18S) były obecne w supernatancie. Gdy mikrotubule zostały spolimeryzowane przez dodanie paklitakselu i GTP, RNA PTH było obecne w peletce mikrotubuli, a rybosomalne RNA wciąż było obecne w supernatancie. Dodanie ATP i NaCl, lub samego ATP, które specyficznie wymywają dyneinę z mikrotubul, wypiera mRNA PTH do supernatantu. Dodanie samego NaCl nie przyniosło efektu. Wskazuje to, że mRNA PTH wiąże się z dyneiną w sposób zależny od ATP. Analiza Western blot jak w b wykazała, że IC było obecne w peletce mikrotubuli i było wymywane przez dodanie ATP i NaCl. W innych doświadczeniach RNA transkrybowano in vitro, stosując szablony dla pełnej długości cDNA PTH i cDNA dla CaSR i dodawano do preparatu mikrotubuli jak poprzednio (Figura 3b). W przypadku braku mikrotubul i po odwirowaniu, transkrypt PTH został znaleziony w supernatancie zgodnie z oczekiwaniami (Figura 3b). Po inkubacji transkryptu PTH ze spolimeryzowanymi mikrotubulami (paklitaksel i GTP), RNA PTH, ale nie RNA CaSR, było obecne w peletce mikrotubuli, a nie w supernatancie (Figura 3b). Analizę Western blot próbek przeprowadzono z użyciem przeciwciała (IC 74-1) dla IC74 dynainy cytoplazmatycznej (18). Ilościowa stechiometria wykazała, że istnieje kopia polipeptydu LC8 na IC 74 (18). Spolimeryzowany kompleks mikrotubul (P na Figurze 3b) zawierał dyneinę IC razem z pełnej długości RNA PTH. Podczas inkubacji z niespolimeryzowaną tubuliną (bez paklitakselu i GTP), transkrypt PTH i IC były obecne w supernatancie (nie pokazano). IC jest integralną częścią kompleksu dyneinowego, którego częścią jest LC8, a zatem IC odzwierciedla lokalizację kompleksu dyneinowego. Wyniki te pokazują, że kolokalizacja mRNA PTH ze spolimeryzowanym granulatem mikrotubuli była taka sama, gdy całkowite RNA z przytarczyc (Figura 3a) lub transkrybowany in vitro pełnej długości RNA PTH (Figura 3b) inkubowano ze spolimeryzowanymi mikrotubulami
[przypisy: cystis epidermalis, storczyki allegro, acetylowany adypinian diskrobiowy ]

0 thoughts on “gaca wczasy odchudzające”

  1. Ja po kilku infekcjach, które u mojego dziecka skończyły się zapaleniem oskrzeli