Skip to content

ginekolog sokołów podlaski tomczuk

4 miesiące ago

524 words

Produkty PCR frakcjonowano pod względem wielkości na 1,8% agarozy w żelach TBE, barwiono bromkiem etydium i fotografowano. Badanie cytofluorometryczne narządów limfatycznych w Agtr1a + / + i Agtr1a. /. myszy. Przeprowadzono cytometrię przepływową na splenocytach i tymocytach, jak opisano wcześniej (31). W skrócie, śledziona i grasica zostały wyizolowane z Agtr1a + / + i Agtr1a. /. myszy i zawiesiny komórkowe otrzymano przez delikatne zmielenie tkanki między sterylnymi szklanymi szkiełkami. Komórki zliczono i ponownie zawieszono (2 x 106 komórek / ml) w zimnym buforze FACS (PBS / 2% FBS / 0,05% NaN3). Podwielokrotności zawieszonych komórek (100 | jl) inkubowano z optymalnymi stężeniami przeciwciała przez 30 minut w 4 ° C i płukano 3 razy w buforze FACS. Zastosowane przeciwciała były następujące: RM2-5 (anty-CD2), 145-2C11 (anty-CD3), GK 1.5 (anty-CD4), 53-6.7 (anty-CD8), 30-H122 (anty-Thy 1.2 ), H57-597 (anty – TCR), PK136 / DX5 (anty-NK1.1), RA36B2 (anty-B220) i M1 / 70 (anty-CD11b) (wszystkie z PharMingen, San Diego, Kalifornia, USA); USA). Nieistotne przeciwciało izotypowe R35-95 (szczurzy IgG2a; PharMingen) zastosowano jako kontrolę niespecyficznego barwienia. Po ostatecznym przemyciu komórki utrwalono PBS zawierającym 2% formaliny i analizowano w ciągu 72 godzin. Analizy i sortowanie przeprowadzono w FACscan (Becton Dickinson, Mountain View, Kalifornia, USA). Próg rozproszenia do przodu został ustawiony, aby wykluczyć martwe komórki i zanieczyszczenia z pozyskania. Przynajmniej x 104 komórek analizowano dla każdego przeciwciała lub kombinacji przeciwciał. Wpływ angiotensyny II na proliferację splenocytów. Zawiesiny pojedynczych komórek splenocytów przygotowano z Agtr1a + / + i Agtr1a2 /. myszy, jak już opisano tutaj. Komórki inkubowano w kompletnym RPMI zawierającym 1% FBS i pozostawiono w pożywce zawierającej .M inhibitora ACE enalaprylu i .M indometacyny w 37 ° C przez 12 godzin. Zakres stężeń angiotensyny II dodano do komórek z lub bez antagonisty receptora AT1, losartanu lub fosfatazy inhibitora kalcyneuryny, cyklosporyny. Po 18 i 30 godzinach hodowli do każdej studzienki dodano 0,5 .l [3H] tymidyny i komórki inkubowano przez dodatkowe 12 godzin w 37 ° C. Proliferację komórek oceniano na podstawie ilości [3H] tymidyny wprowadzonej przez komórki. Aby obliczyć specyficzną inkorporację [3H] tymidyny, odczyty 3H na minutę ze studzienek bez angiotensyny II odjęto od dołków zawierających angiotensynę II. Mieszane odpowiedzi limfocytów. Pierwotne jednokierunkowe mieszane odpowiedzi limfocytów (MLR) przeprowadzono w sposób opisany uprzednio (31). Zawiesiny pojedynczych komórek splenocytów odpowiadających rekonstytuowano w różnych stężeniach i mieszano z napromieniowanymi splenocytami stymulującymi we wskazanych stosunkach. Pięć mikrolitrów każdej zawiesiny komórek dodano do poszczególnych studzienek 96-studzienkowej płytki z lub bez inhibitorów farmakologicznych. Po różnych okresach inkubacji komórki poddano pulsacji 0,5 .l [3H] tymidyny na studzienkę w końcowych 18 godzinach hodowli. Komórki zebrano, a zawartość [3H] tymidyny związanej z komórkami określono przez zliczanie scyntylacyjne. Wartości wyrażono jako swoiste zliczenia na minutę (liczby z dołków, które tylko respondenci odjęto od zliczeń z dołków z reagującymi i stymulatorami), z każdym punktem mierzonym w trzech lub czterech próbkach. Przeszczepienie serca myszy. Heterotopowe przeszczepy serca u myszy przeprowadzono w sposób opisany uprzednio (31). Odbiorca C57BL / 6 (H-2b) Agtr1a + / + i Agtr1a. /. myszy znieczulono izofluranem i przygotowano przez oddzielenie aorty i żyły głównej między naczyniami nerkowymi a bifurkacją tętnic biodrowych
[więcej w: mielopatia szyjna objawy, storczyki allegro, allegro tangle teezer ]

0 thoughts on “ginekolog sokołów podlaski tomczuk”