Skip to content

goya oliwa z oliwek

2 miesiące ago

551 words

Różnicowanie oceniano przez pomiar ekspresji CDllb i / lub CD66b przy użyciu skoniugowanych z fikoerytryną monoklonalnych przeciwciał i FACS3, jak opisano wcześniej (22). Plazmidy. Konstruktory reportera acetylotransferazy chloramfenikolu (CAT) zawierające domniemaną RARE od C / EBP. region promotor / wzmacniacz (RAREC / EBP.) zostały skonstruowane. Każda z 2 lub 3 kopii oligonukleotydów dzikiego typu lub zmutowanych (mut) w powtórzeniach tandemowych została wytworzona dwuniciowo przez samowzbudzenie i sklonowana w miejscu SalI pBLCAT2 (PRE) (33) w górę od promotora tkanek opryszczki bez enhancerless tk wirus (RAREn-tk-CAT lub mut-RAREn-tk-CAT) (patrz rysunek 2a). Konstruktor reportera CAT (z lub bez minimalnego promotora tk), który zawiera 0,5 kb C / EBP. powyżej miejsca startu transkrypcji (p0.5-tk-CAT, p0.5-CAT) również zostały skonstruowane podobnie. Zmutowane plazmidy reporterowe promotora (mut-p0.5-tk-CAT, mut-p0.5-CAT) zawierające takie same zmiany nukleotydowe jak mut-RAREC / EBP. zostały skonstruowane przy użyciu ukierunkowanej mutagenezy, jak opisano wcześniej (34). Cytotegalowirusowe plazmidy ekspresyjne pCMX-RARa, pCMX-RARa403 i pCMX-PML / RAR. (9, 35) i pusty wektor pCMX zostały dostarczone przez RM Evansa (The Salk Institute, San Diego, California, USA). Konstrukt reportera CAT, który nie zawiera domniemanego miejsca RARE (PRE) zastosowano jako kontrolę ujemną. Plazmidy fuzyjne S-transferazy glutationowej (GST) pGEX-RAR. i pGEX-RXR. (36) były prezentami od CK Glass (University of California. San Diego, La Jolla, Kalifornia, USA). C / EBP indukowalny cynkiem. wektor ekspresyjny (pMT-a 32) został skonstruowany przez wstawienie pełnej długości C / EBP. cDNA (p. 32) w miejscach XhoI i Hindlll w MTCB6 + (pMT) (miły prezent od FJ Rauscher, III, The Wistar Institute, Philadelphia, Pennsylvania, USA) (37). Rys. 2Transaktywacyjne zdolności C / EBP. promotor / wzmacniacz. (a) Schemat konstruktów reporterowych CAT z przypuszczalnym elementem odpowiedzi na kwas retinowy z C / EBP. (RAREC / EBP .), zmutowany RAREC / EBP ., 0,5 kb C / EBP. region promotor / wzmacniacz i zmutowany 0,5 kb C / EBP. region promotor / enhancer. (b) Transaktywacja C / EBP indukowana retinoidami. promotor / wzmacniacz w komórkach COS-1. Transaktywacja C / EBP. promotor / wzmacniacz reporterów CAT przez RAR ., zmutowany RAR. (RAR. 403) i PML / RAR. porównywano w obecności (kreskowane kreski) lub nieobecności (stałe słupki) ATRA (10. 6 M). Powtórną indukcję transaktywacji oblicza się w stosunku do pCMX transfekowanego bez traktowania ATRA. (c) Transaktywacja C / EBP zależna od retinoidów. promotor / wzmacniacz w linii komórkowej białaczki szpikowej KCL22. (d) zależna od retinoidu transkrypcyjna aktywacja RAREC / EBPa-tk-CAT (reporter CAT zawierający 3 kopie domniemanego RARE znalezionego w regionie promotora / wzmacniacza C / EBP . w tandemowym powtórzeniu powyżej minimalnego promotora tk) w COS-1 komórki. (e) Brak zależnej od retinoidów aktywacji transkrypcyjnej przez mut-p0.5-tk-CAT w komórkach COS-1. (f) wiązanie DNA i EMSA RAR / RXR do RAREC / EBP .. RAREC / EBP z etykietą 32P. oligonukleotyd zastosowano jako sondę do wiązania DNA i EMSA z kontrolą GST-RAR, GST-RXR lub GST. W przypadku zawodów RAREC / EBP o nieznakowanym dzikim typie lub zmutowanym. oligonukleotydy w rosnących ilościach (1-, 10- lub 100-krotny nadmiar) zastosowano w reakcji wiązania z znakowanym radioaktywnie 32P RAREC / EBP. i heterodimer RAR / RXR. Pasma a i b reprezentują homodimery RAR / RAR lub heterodimery RAR / RXR związane z RAREC / EBP. sonda oligonukleotydowa. Pasmo c reprezentuje niezwiązaną sondę. Rozwój komórek U937-pMT 32. Łącznie 2,5 × 107 komórek U937 poddano elektroporacji w ElectroSquarePorator T820 (BTX, San Diego, Kalifornia, USA) z 40 .g albo pMT 32 albo pustego wektora (pMT) i 10 .g plazmidu pEGFP (CLONTECH Laboratories Inc. , Palo Alto, Kalifornia, USA) przy 320 V przez 30 milisekund
[patrz też: serwatka z mleka owczego, grzybek tybetański allegro, mielopatia szyjna objawy ]

0 thoughts on “goya oliwa z oliwek”