Skip to content

Inaktywacja mutacji w genie 1-hydroksylazy D3 1-hydroksywitaminy u pacjentów z krzywicą pseudowitaminową D-Deficiency ad 5

2 miesiące ago

429 words

Bratanek Pacjenta 4 był normalną homozygotą. Analiza funkcjonalna białek 1.-hydroksylazowych typu dzikiego i zmutowanych
Figura 4. Figura 4. Analiza funkcjonalna białek 1.-hydroksylazowych typu dzikiego i zmutowanych. Panel A pokazuje schemat układu testowego dla aktywności 1.-hydroksylazy. Komórki COS-1 transfekowano plazmidami ekspresyjnymi GAL4-VDR (DEF), 17M2-G-CAT, adrenodoksyną i reduktazą adrenodoksyny razem z plazmidem ekspresyjnym 1.-hydroksylazy typu dzikiego lub zmutowanym w obecności 25-hydroksywitaminy D3 (25 ( OH) D3). Gdy wyrażana 1.-hydroksylaza przekształca 25-hydroksywitaminę D3 w 1., 25-dihydroksywitaminę D3 (1., 25 (OH) 2D3), aktywowany GAL4-VDR (DEF) indukuje ekspresję acetylotransferazy chloramfenikolu (CAT) na genie reporterowym (17M2 -G-CAT) poprzez sekwencję aktywującą GAL4 powyżej (GAL4-UAS), a aktywność 1.-hydroksylazy można analizować za pomocą testu acetylotransferazy chloramfenikolu.
Panel B pokazuje aktywność 1.-hydroksylazy 1.-hydroksylazy typu dzikiego i zmutowanej, jak określono za pomocą testu pokazanego w Tablicy A. Znacząca aktywacja nie została wykryta przy braku 25-hydroksywitaminy D3 (ścieżka 1) lub plazmidu ekspresyjnego 1.-hydroksylazy. (linia 2); jednakże 1., 25-dihydroksywitamina D3 skutecznie indukowała aktywność acetylotransferazy chloramfenikolu (ścieżki 6 i 7). Ekspresja 1.-hydroksylazy indukowanej chloramfenikolem aktywności acylotransferazy chloramfenikolu w sposób zależny od dawki (ścieżki 3 i 4), jak zaobserwowano w 1.-hydroksylazie myszy (ścieżka 5). 16 Natomiast żaden z mutantów nie zwiększył aktywności gen reporterowy (ścieżki 8, 9, 10 i 11). Przedstawiono wyniki jednej reprezentatywnej próby acetylotransferazy chloramfenikolu i wykres odpowiadający wartości średniej (. SE) dla trzech niezależnych eksperymentów.
Panel C pokazuje konwersję 25-hydroksywitaminy D3 do 1., 25-dihydroksywitaminy D3 przez 1.-hydroksylazę, co określono za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej. Wyniki wysokosprawnej chromatografii cieczowej w fazie normalnej przedstawiono po lewej stronie, a po prawej stronie w wysokosprawnej chromatografii cieczowej w układzie faz odwróconych. Górne panele pokazują czasy retencji autentycznych pochodnych witaminy D (1.-hydroksywitamina D3 [1. (OH) D3], 25-hydroksywitamina D3, 24R, 25-dihydroksywitamina D3 [24R, 25 (OH) 2D3], 1., 25- dihydroksywitaminę D3 i 1., 24R, 25-trihydroksywitaminę D3 [1., 24R, 25 (OH) 3D3]), co określono na podstawie absorpcji w ultrafiolecie przy 264 nm. Dolne panele pokazują wytwarzanie 1., 25-dihydroksywitaminy D3, jak określono za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej, gdy komórki COS-1 transfekowano plazmidem ekspresyjnym 1.-hydroksylazy typu dzikiego w obecności trytowanej 25-hydroksywitaminy D3. Należy zauważyć, że czasy retencji przekształconego metabolitu odpowiadają czasom retencji autentycznej 1., 25-dihydroksywitaminy D3 zarówno w fazie normalnej, jak i w fazie odwróconej (strzałki).
Panel D pokazuje konwersję 25-hydroksywitaminy D3 do 1., 25-dihydroksywitaminy D3 przez dzikie typy (linia 2) i mutanty (ścieżki 3, 4, 5 i 6) białka 1.-hydroksylazy. Aktywność 1.-hydroksylazy oznaczono metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej, tak jak w panelu C. Należy zauważyć, że wszystkie mutanty nie przekształciły 25-hydroksywitaminy D3 w 1., 25-dihydroksywitaminę D3 (ścieżki 3, 4, 5 i 6).
[hasła pokrewne: flexagen, teosyal, ambroksol ]
[więcej w: allmedica nowy sącz, slimtox allegro, młody jęczmień allegro ]

0 thoughts on “Inaktywacja mutacji w genie 1-hydroksylazy D3 1-hydroksywitaminy u pacjentów z krzywicą pseudowitaminową D-Deficiency ad 5”

  1. [..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: okulista wrocław prywanie[…]