Sto mikrogramów preparatu tubuliny (20 .M) w objętości 50 .l poddano polimeryzacji in vitro przez dodanie 20 .M paklitakselu (Sigma), .M GTP i 30% glicerolu i inkubowano w 37 ° C dla 10 minut. Całkowity RNA ekstrahowano z tkanki tłuszczowej tarczycy przez Tri-reagent (Molecular Research Center Inc.) (6), 2 .g całkowitego RNA dodano do zmontowanych mikrotubuli (paklitaksel, GTP) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez 20 minut, aby umożliwić wiążący. Próbki umieszczono następnie na poduszce z sacharozą 200-30 L 30% i odwirowano przy 40 000 g przez godzinę w 20 ° C. W niektórych eksperymentach do prepar...
Zastosowaliśmy test RT-PCR w celu określenia, które populacje komórkowe w śledzionie ulegają ekspresji w mRNA receptora AT1A. Jak pokazano na Figurze 3, mRNA receptora AT1A można było zamplifikować z RNA otrzymanego z populacji komórek T, komórek B lub makrofagów, które wyizolowano ze śledzion myszy C57BL / 6 typu dzikiego. Zatem receptor AT1A jest zdecydowanie dominującym receptorem angiotensyny II ekspresjonowanym przez komórki odpornościowe w śledzionie. Figura 2 [125I] wiązanie radioliganda angiotensyny II w splenocytach myszy. [125I] Wiązanie radioliganda z angiotensyną II w zawiesinach komórkowy...
System renina-angiotensyna (RAS) jest kluczowym regulatorem napięcia naczyniowego i ciśnienia krwi. Ponadto, angiotensyna II ma również szereg efektów komórkowych, które mogą przyczyniać się do patogenezy choroby. Używając Agtr1a. /. Myszy, którym brakuje receptorów AT1A dla angiotensyny II, zidentyfikowaliśmy nową funkcję RAS do modulowania układu odpornościowego. Stwierdziliśmy, że angiotensyna II, działając poprzez receptory typu (AT1) na komórkach odpornościowych, wyzwala proliferację limfocytów śledziony. Działania te przyczyniają się do wigoru komórkowych odpowiedzi alloimmu...
