Skip to content

poradnia seksuologiczna gliwice

4 miesiące ago

577 words

Ograniczona sonda mRNA PTH bez 3 -UTR nie wykazywała wiązania (Figura 2b). Sonda RNA dla y-JR CaSR 3 również nie wiązała LC8 (Figura 2b). Transkrypt regionu kodującego CaSR również nie wykazywał wiązania (nie pokazano). Te żele wykazują, że LC8 wiąże się swoiście z p-mRNA 3 -UTR. Aby wytyczyć region wiążący białko w 3 -UTR, transkrypt RNA PTH, który wyłączył koniec 60 nukleotydów z 239 nukleotydów 3 a -UTR, analizowano pod kątem wiązania z LC8 przez REMSA i nie wykazywał wiązania (nie pokazano). . Wykazaliśmy wcześniej, że ten region końca 60-nt jest ważny dla interakcji białek przytarczyc z mRNA PTH i dla stabilności mRNA PTH (10). LC8 jest częścią kompleksu dyneinowego, który jest motorem molekularnym, który przemieszcza się wzdłuż mikrotubul (20, 21). Ponieważ LC8 wiąże mRNA PTH, zapytaliśmy, czy LC8 pośredniczy w interakcji między mRNA PTH i mikrotubulami. W związku z tym zbadaliśmy wiązanie mRNA PTH do mikrotubuli i jego rywalizację za pomocą LC8. Preparat mikrotubul mózgowych łydek, który zawierał białka związane z mikrotubulami (MAP) inkubowano z paklitakselem i GTP w celu ułatwienia polimeryzacji podjednostek tubuliny do mikrotubul, lub bez paklitakselu i GTP. Spolimeryzowane i niespolimeryzowane mikrotubule inkubowano z całkowitym RNA z tkance tarczycy tarczycy, aby umożliwić wiązanie. Próbki następnie załadowano na poduszkę z sacharozą i odwirowano w celu oddzielenia peletki zawierającej spolimeryzowane mikrotubule i powiązane białka z supernatantu. RNA wyekstrahowano z peletki i supernatantu i przeprowadzono analizę Northern blot w celu identyfikacji mRNA PTH. Bez paklitakselu i GTP, PTH w mikrotubulach z przytarczyc był w supernatancie mikrotubuli mózgu (nie pokazano). W obecności paklitakselu i GTP, mRNA PTH był obecny w peletce mikrotubuli, a nie w supernatancie (Figura 3a). Gdy zwiększając stężenie egzogennego LC8 dodano do spolimeryzowanego RNA preparatu mikrotubuli, następowało stopniowe przesuwanie mRNA PTH z peletki do supernatantu (Figura 3a). Analiza Western blot próbek z peletki i supernatantu z przeciwciałem do LC8 (R4058, pozycja 18) wykazała, że endogenny LC8 był obecny w spolimeryzowanym granulacie mikrotubuli, a nie w supernatancie (nie pokazano). Dodanie LC8 nie zmieniło ilości LC8 w peletce wszystkich próbek, a także nie miało wpływu na polimeryzację mikrotubuli, jak widać za pomocą mikroskopu elektronowego (nie pokazano). Wyniki te wskazują, że translokacja mRNA PTH z peletki mikrotubuli do supernatantu nie była skutkiem działania LC8 na rozerwanie mikrotubuli, lecz raczej na skutek wiązania kompetycyjnego. LC8 dodano do preparatu mikrotubuli w stosunku 1: 500 (wagowo). Stosunek endogennego LC8 do mikrotubul nie jest znany. Dodane LC8 w rosnących ilościach miało wpływ zależny od dawki, aby przeprowadzić translokację mRNA PTH z peletki mikrotubuli do supernatantu. Sugeruje to, że ilość dodanego białka LC8 ma znaczenie funkcjonalne w stosunku do ilości endogennego LC8 obecnego w preparacie mikrotubuli. Gdy inne białko, BSA, dodano do testu mikrotubuli w podobnych stężeniach do LC8, nie było przesunięcia mRNA PTH do supernatantu (nie pokazano). Kolokalizacja mRNA PTH ze spolimeryzowanym peletkiem preparatu mikrotubul i jego przejście do supernatantu po dodaniu wzrastających ilości LC8, pokazuje, że mRNA PTH wiąże mikrotubule i że LC8 konkuruje o to wiązanie. Wyniki te sugerują, że LC8 jest ważny dla oddziaływania mikrotubul z mRNA PTH. Rysunek 3: Kolonizacja mRNA 3PTH za pomocą mikrotubul zależy od LC8
[podobne: leobert allegro, rozpoznanie wg icd 10, allmedica nowy sącz ]

0 thoughts on “poradnia seksuologiczna gliwice”