Skip to content

przychodnia ortopedyczna ruda śląska

4 miesiące ago

571 words

Wektory ekspresyjne receptora retinoidowego pCMX-RAR. (wektor ekspresyjny RARy typu dzikiego), pCMX-RARa403 (dominujący negatywny zmutowany wektor ekspresyjny RARa) i pCMX-PML / RAR. (Wektor ekspresyjny PML / RAR3) lub pCMX (pusty wektor) kotransfekowano C / EBP. plazmidy reporterowe promotor / wzmacniacz CAT lub PRE w komórki COS-1. Kotransfekcja wektorów PRE i ekspresyjnych wykazywała minimalny poziom transaktywacji bez jakiejkolwiek odpowiedzi na RA (Figura 2b). Ani RAR typu dzikiego. ani białka fuzyjnego PML / RAR. wykazały konstytucyjną transaktywację 0,5-kb C / EBP. konstrukty reportera promotora / wzmacniacza. Jednak w obecności ATRA (10. 6 M), oba RAR. i PML / RAR. konstrukcje mogłyby w równym stopniu przenosić C / EBP. plazmidy reporterowe promotor / wzmacniacz CAT (Figura 2b), sugerując obecność funkcjonalnego RZADKA w C / EBP. konstrukcja w górę. Jak oczekiwano, kotransfekcja pustego wektora ekspresyjnego (pCMX) lub konstruktu RARy403 dominującego negatywnego receptora (pCMX-RARa403) z reporterem zawierającym sekwencje C / EBP. nie wykazywały transaktywacji indukowanej ATRA (Figura 2b). Obydwa konstrukty zi bez tk zostały zbadane, ponieważ początkowe badania z 5,2 kb C / EBP. konstrukt reportera promotora / wzmacniacza bez minimalnego promotora tk nie wykazał transaktywacji ani w obecności ATRA ani jej nieobecności (dane nie pokazane). Przeciwnie, w obecności minimalnego promotora tk, konstrukt 5,2-kb wykazywał zależną od RA transaktywację (dane nie pokazane). Sugeruje to, że region promotorowy / wzmacniacz 5,2 kb może zawierać represory C / EBP. transkrypcja, które znajdują się powyżej 500 pz powyżej początku transkrypcji. Aby zbadać specyficzną aktywność transkrypcyjną typu swoistego dla typu komórki, podobne doświadczenia przeprowadzono w liniach komórkowych U937 i KCL22 z białaczką szpikową. W obu liniach komórkowych obserwowano transaktywację indukowaną ATRA z p0.5-tk-CAT zarówno przez RAR. i PML / RAR. (Figura 2c i dane nie pokazane). Z powodu tych wyników, C / EBP 500 pz. region promotora / wzmacniacza został zsekwencjonowany i odkryliśmy potencjalny RZAD, który wynosił 190 bp powyżej miejsca rozpoczęcia tłumaczenia (23). Ten potencjalny RARE składał się z 2 pół-miejsc, AGGTCA i AGGTAG, rozdzielonych oczekiwanymi 5 nukleotydami. Aby pokazać, że reaktywna w ATRA transaktywacja C / EBP. w tym RZADKU występuje promotor / wzmacniacz, albo 2 lub 3 kopie oligonukleotydu dzikiego typu lub zmutowanego (mut) oligonukleotydu w powtórzeniach tandemowych wstawiono powyżej promotora tkankowego bez enhancerless i reportera CAT (RAREn-tk-CAT lub mut-RAREn- tk-CAT) (rysunek 2a). Zgodnie z oczekiwaniami, RARE3-tk-CAT wykazało 10-krotną transaktywację zarówno przez RAR. i PML / RAR ., podczas gdy mutacje w 2 pół-stronach zniosły indukowany ATRA wzrost aktywności reportera (Figura 2d i dane nie pokazane), sugerując, że ten RAREC / EBP. jest przede wszystkim odpowiedzialny za zwiększenie poziomu C / EBP. zaobserwowane w odpowiedzi na ATRA. Wyniki te potwierdzono, gdy przeprowadzono taką samą mutację w konstruktach reporterowych promotora 0,5 kb (Figura 2, a i e oraz dane nie pokazane). Zgodnie z naszą hipotezą, testy przesunięć ruchliwości elektroforetycznej (EMSA) wykazały, że heterodimery RAR / RXR wyrażane w E. coli wiążą się z RAREC / EBP. in vitro (rysunek 2f). Wiązanie było kompetentnie hamowane przez nieznakowany RAREC / EBP typu dzikiego. oligonukleotydy, ale nieznakowany mut-RAREC / EBP. oligonukleotydy słabo konkurowały, potwierdzając w ten sposób, że RAR / RXR wiąże się swoiście z RAREC / EBP .. Wyrażenie PML / RAR. w linii komórkowej białaczki szpikowej U937 silnie wzmacnia C / EBP indukowany ATRA. wyrażenie. Aby dalej zbadać rolę PML / RAR. białko fuzyjne w indukcji C / EBP. ekspresję, wykorzystano komórki U937PR9 i U937B412 generowane przez stabilną transfekcję plazmidu MTPR indukowalnego cynkiem zawierającego PML / RAR. cDNA (29) i PLZF / RAR. cDNA (30), odpowiednio
[przypisy: slimtox allegro, philips lumea allegro, wodniak powrózka nasiennego ]

0 thoughts on “przychodnia ortopedyczna ruda śląska”