Skip to content

staszica 22 kwidzyn pomorskie

4 miesiące ago

601 words

Dane te wskazują, że komórki Th1 i Th2 mogą współpracować w tym ustawieniu w celu promowania eozynofilowego zapalenia dróg oddechowych. Metody Zwierzęta. Myszy BALB / c otrzymano od Harlan Sprague Dawley Inc. (Indianapolis, Indiana, USA). Transgeniczne myszy transgeniczne (43) TCR skrzyżowane z myszami z niedoborem genu aktywującego rekombinację RAG-2 zostały dostarczone przez O. Kanagawę (Washington University, St. Louis, Missouri, USA). Transgen DO1.10 i mutacja RAG-2 były krzyżowane wstecznie na tle BALB / c (H-2d, Thy1.2) przez ponad 10 pokoleń przed ich użyciem w tych eksperymentach. Dla wybranych eksperymentów myszy C57BL / 6 Thy1.1 (H-2b, The Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine, USA) zostały krzyżowane wstecznie 2 pokolenia na myszach BALB / c, selekcjonując pod kątem obecności allelu Thy1.1 i nieobecności alleli MHC H-2b przez analizę cytometrii przepływowej leukocytów krwi obwodowej. Następnie myszy krzyżowano z myszami BALB / c DO11.10 w celu wytworzenia myszy Thy1.1 DO11.10. Wszystkie myszy użyte w tych doświadczeniach były płci żeńskiej w wieku 4. 6 tygodni. Myszy przechowywano w warunkach wolnych od patogenu, z pożywieniem i wodą dostarczanymi ad libitum, a wszystkie eksperymenty zostały zatwierdzone przez komitet instytucjonalny Uniwersytetu Waszyngtońskiego do humanitarnego wykorzystania zwierząt laboratoryjnych. Przygotowanie zróżnicowanych komórek T CD4 +. Komórki Th1 i Th2 specyficzne względem OVA zostały wytworzone in vitro, jak opisano wcześniej (36, 44). Pokrótce, komórki T CD4 + L-selektyny + oczyszczone ze śledziony myszy transgenicznych DO11.10 TCR pozbawionych RAG-2 (3, hodowano w pożywce komórek T (pożywka Iscove uzupełniona 10% FCS [HyClone Laboratories, Logan, Utah USA], 0,01 mM nieistotnego aminokwasu, 2 mM glutaminianu sodu, mM pirogronianu sodu, 100 j./ml penicyliny, 100 .g / ml streptomycyny i 5,5 .M 2-merkaptoetanolu, wszystko z GIBCO BRL [Grand Island, New York, USA]) z napromieniowanymi splenocytami BALB / c w stosunku 1:20 przez 3 dni w obecności 0,3 .M OVA (323-339) peptydu. Do polaryzacji do komórek Th1, IL-12 (2 ng / ml, R & D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA) i antyA IL-4 (klon 11B11, 10 ug / ml, dzięki uprzejmości KM Murphy, Washington University) zostały dodane. Do polaryzacji do komórek Th2 dodano IL-4 (1000 U / ml; R & D Systems Inc.) i anty-IL-12 (klon TOSH, 10 ug / ml, dzięki E. Unanue, Washington University). W dniu 3 dodano 4-krotny nadmiar pożywki i IL-2 (40 U / ml; R & D Systems Inc.). W dniu 7 komórki zamrożono w FCS zawierającym 10% DMSO. Przed przeniesieniem do myszy biorcy komórki rozmrożono i ponownie stymulowano napromieniowanymi splenocytami BALB / c i peptydem 0,3 (O M OVA. Supernatanty do ELISA zebrano po 48 godzinach. Po 72 godzinach komórki rozcieńczono 4-krotnie na pożywce z 40 U / ml IL-2. Komórki stosowano do przeniesienia w dniu 8 lub 9 hodowli. Profile cytokin każdej partii komórek potwierdzono przez wewnątrzkomórkowe barwienie cytokin lub testem ELISA przy użyciu zestawów ELISA Quantikine (R & D Systems Inc.) zgodnie z instrukcjami producenta. Komórki hodowane w ten sposób są silnie spolaryzowane do fenotypu Th1 lub Th2 (36). Nadsącza Th1 typowo zawierają więcej niż 1000 ng IFN-y / ml i mniej niż 0,04 ng IL-4 / ml. Supernatanty Th2 zawierają mniej niż 3 ng IFN-y / ml i więcej niż 4 ng IL-4 / ml. Ponadto mniej niż 0,1% komórek Th1 jest dodatnich pod względem wewnątrzkomórkowej IL-5, podczas gdy 30 ~ 40% komórek Th2 jest dodatnich, gdy są analizowane za pomocą cytometrii przepływowej. Indukcja i analiza stanu zapalnego dróg oddechowych. Myszy znieczulono Metofanem (metoksyfluranem, Schering-Plough Animal Health Corp., Union, New Jersey, USA) i wstrzyknięto dożylnie wskazaną liczbę limfocytów T. Następnego dnia myszy umieszczono w komorze z pleksiglasu przymocowanej do nebulizatora klinicznego (Ultra-Neb 99; DeVilbiss Health Care Inc., Sommerset, Pennsylvania, USA) i prowokowano przez 20 minut rano i po południu aerozolem o stężeniu 1%. (wt / vol) OVA (klasa V, Sigma Chemical Co., St
[patrz też: wodniak powrózka nasiennego, cystis epidermalis, młody jęczmień allegro ]

0 thoughts on “staszica 22 kwidzyn pomorskie”