Skip to content

Wiązanie lekkiego łańcucha dyneinowego z sekwencją nieulegającą translacji 3 (3 pośredniczy w związku mRNA parathormonu z mikrotubulami

3 miesiące ago

624 words

Region 3. -Terranslated (UTR) mRNA wiąże białka, które określają stabilność i lokalizację mRNA. 3. -UTR mRNA parathormonu (PTH) specyficznie wiąże białka cytoplazmatyczne. Przeszukiwaliśmy bibliotekę ekspresyjną dla białek, które wiążą się z pTH mRNA 3a -UTR, a sekwencja klonu była identyczna z sekwencją lekkiego łańcucha dyneiny LC8, składnika kompleksów dyneinowych, które przemieszczają składniki cytoplazmatyczne wzdłuż mikrotubul. Rekombinowany LC8 wiąże PTH mRNA 3a -UTR, jak pokazano w teście przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej RNA. Wykazaliśmy, że mRNA PTH jest kolokalizowany z mikrotubulami w gruczole przytarczycznym, jak również z oczyszczonym preparatem mikrotubuli z mózgu łydki i że w tym połączeniu pośredniczy LC8. Zgodnie z naszą wiedzą jest to pierwszy raport o złożonym białku z dyneiny wiążącym mRNA. Kompleks dyneinowy może być motorem odpowiedzialnym za transport mRNA do określonych miejsc w cytoplazmie, a w konsekwencji jest asymetrycznym rozkładem translowanych białek w komórce. Wprowadzenie W surowicy utrzymuje się wapń o wąskim zakresie fizjologicznym, głównie dzięki działaniu parathormonu (PTH), który działa razem z biologicznie aktywnym metabolitem witaminy D, l, 25-dihydroksywitaminę D (1,25 (OH) 2D3) (1). 7-transmembranowy receptor wapniowy (CaSR) w komórce przytarczycznej rozpoznaje niewielkie obniżenie poziomu jonów wapnia w surowicy w celu zwiększenia wydzielania PTH (2). Niski poziom wapnia w surowicy zwiększa nie tylko wydzielanie PTH, ale także poziom mRNA PTH (3), a jeśli jest dłuższy, proliferację komórek przytarczyc (4). PTH i 1,25 (OH) 2D3 dzielą kolejny poziom regulacji w tym 1,25 (OH) 2D3, a następnie działają na przytarczyce w celu zmniejszenia transkrypcji genu PTH, kończąc tym samym endokrynologiczną pętlę sprzężenia zwrotnego (5). Fosforan reguluje także przytarczyce, z niskim poziomem fosforanu w surowicy zmniejszając poziomy mRNA PTH, PTH w surowicy i proliferację komórek przytarczyc (6. 9). Wpływ wapnia i fosforanu na ekspresję genu PTH in vivo jest zarówno potransakcyjny (6, 10). CDNA PTH składa się z 3 eksonów kodujących region nieulegający translacji 5 (5 UTR, ekson I): region prepro PTH (ekson II) i hormon strukturalny, wraz z 3 -UTR (ekson III) (11, 12). Szczur 3a -UTR ma długość 239 nukleotydów (nt) na długim odcinku od 712 nt pełnej długości RNA PTH (12). 3 -UTR jest 42% konserwowany pomiędzy człowiekiem i szczurem, podczas gdy region kodujący jest 78% konserwatywny (12). Pokazaliśmy, że białka cytosolowe z przytarczyc wiążą się z 3 (3 -UTR mRNA PTH szczura i regulują stabilność mRNA (10). Białka przytarczyc ze szczurów hipokalcemicznych wykazują zwiększone wiązanie z mRNA pR -UTR na sieciowaniu w ultrafiolecie (UV) i teście przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej RNA (REMSA), a wiązanie tego białka z RNA zmniejsza się z białkami przytarczycowymi z podhipotermią. Te zmiany w wiązaniu białko-RNA korelują z poziomami mRNA PTH. Nie ma przytarczycznej linii komórkowej; w związku z tym zastosowano test stabilności PTH RNA in vitro i wykazano stabilizację transkryptu za pomocą białek hipokalcemicznych i wyraźną niestabilność białek hipofosfatematu (10). Badania te wskazują, że istnieją regiony niestabilności w PTH mRNA 3a -UTR, które są chronione białkami wiążącymi RNA. Zapewniają one pewien wgląd w posttransskrypcyjną regulację mRNA PTH przez wapń i fosforan. Wiadomo, że wiązanie się białek cytoplazmatycznych z 3 -UTR mRNA pośredniczy nie tylko w stabilności, ale także w wewnątrzkomórkowej lokalizacji wielu mRNA (13-15). Przeprowadziliśmy badania w celu scharakteryzowania interakcji białko-RNA zaangażowanych w regulację transkrypcji PTH. W celu zidentyfikowania białek, które wiążą się z p-RNA mRNA pTH, opracowaliśmy nowatorski sposób klonowania metodą Northwestern, przy użyciu sondy RNA do badania przesiewowego pod kątem białek wiążących RNA.
[patrz też: philips lumea allegro, allmedica nowy sącz, barszcz zwyczajny a sosnowskiego różnice ]

0 thoughts on “Wiązanie lekkiego łańcucha dyneinowego z sekwencją nieulegającą translacji 3 (3 pośredniczy w związku mRNA parathormonu z mikrotubulami”